根据法律规定，大客车在凌晨两点到五点不可以在国道行驶。由于高速公路本身的较低的安全系数。夜间能见度不高司机视认性差。夜间司机的驾驶疲劳，凌晨三四点是高速公路客车事故频发时段，大客车班次被安排在了五点之后，五点之前不允许行驶。禁止大客车行驶从根本上杜绝了此时间段的交通事故。大客车人多，安全第一。长途客运车辆在凌晨2点到5点禁止在高速上行驶，但对于其他车辆没有此规定。也就是说，私家车（小车）一天24小时都是可以在高速上行驶的，没有禁行时间。
我国《道路旅客运输企业安全管理规范》，对客运车辆凌晨2点到5点的运行规则作了规定。 根据这个文件规定，长途客运车辆在凌晨两点到五点之间停止运行，或者实行接驳运输，从事线路固定的机场、高铁快线以及短途驳载，并且单纯的运营历程在100公里以内的客运车辆，在确保安全的前提下，不受凌晨两点到五点的通行限制。
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